Concentration-dependent inhibition of Streptococcus mutans metabolic activity by purified Croton lechleri latex (sangre de grado) in vitro
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Background
Chlorhexidine is the reference chemical antiplaque agent, but its adverse effects motivate the search for plant-derived alternatives. The proanthocyanidin-rich latex of Croton lechleri (sangre de grado) is a candidate, yet quantitative concentration–response data against Streptococcus mutans are scarce.
Methods
In this exploratory in vitro study, ethanol-purified C. lechleri latex was tested at working concentrations of 3–100% v/v (final in-well concentrations 0.6–20% v/v) against S. mutans ATCC 25175 in a 96-well resazurin assay with dual-wavelength reading (570/600 nm) and correction for medium and latex color. Chlorhexidine 1% (0.2% in-well) was the positive control. Each condition was run in technical triplicate within a single experiment. Data were analyzed by one-way ANOVA, Tukey’s test with simultaneous 95% confidence intervals (CI) and four-parameter logistic regression.
Results
Metabolic activity decreased monotonically with concentration, from 101.3 ± 1.7% (vehicle) to 54.0 ± 4.7% (12%),15.5 ± 4.0% (50%) and 8.6 ± 7.7% (100%), compared with 3.1 ± 2.8% for chlorhexidine ( F 7,16 = 160.7, p < 0.001). The lowest concentration that differed from the vehicle was 6% (difference 17.6 percentage points, 95% CI 2.1–33.1). The estimated half-maximal inhibitory concentration (IC 50 ) was 12.3% v/v (95% CI 9.5–15.1). Differences from chlorhexidine at 50% and 100% were not statistically significant, but their confidence intervals were compatible with differences of up to 28 and 21 percentage points, respectively.
Conclusions
Purified C. lechleri latex inhibited the metabolic activity of planktonic S. mutans in a concentration-dependent manner. These preliminary findings do not establish equivalence with chlorhexidine and warrant replication in independent experiments with chemically standardized extracts expressed in mg/mL, determination of MIC/MBC and biofilm models.
Resumen
Introducción
La clorhexidina es el agente antiplaca de referencia, pero sus efectos adversos motivan la búsqueda de alternativas de origen vegetal. El látex de Croton lechleri (sangre de grado), rico en proantocianidinas, es un candidato, aunque faltan datos cuantitativos de concentración–respuesta frente a Streptococcus mutans .
Métodos
En este estudio exploratorio in vitro se evaluó el látex de C. lechleri purificado con etanol a concentraciones de trabajo de 3–100% v/v (0,6–20% v/v en el pozo) frente a S. mutans ATCC 25175 mediante resazurina en microplaca de 96 pozos, con lectura a 570/600 nm y corrección por medio y color del látex. La clorhexidina al 1% (0,2% en el pozo) fue el control positivo. Cada condición se evaluó por triplicado técnico en un único experimento. Se aplicó ANOVA de una vía, prueba de Tukey con intervalos de confianza (IC) simultáneos al 95% y regresión logística de cuatro parámetros.
Resultados
La actividad metabólica disminuyó de forma monótona con la concentración, de 101,3 ± 1,7% (vehículo) a 54,0 ± 4,7% (12%), 15,5 ± 4,0% (50%) y 8,6 ± 7,7% (100%), frente a 3,1 ± 2,8% con clorhexidina ( F 7,16 = 160,7; p < 0,001). La menor concentración que difirió del vehículo fue 6% (diferencia de 17,6 puntos porcentuales; IC 95% 2,1–33,1). La concentración inhibitoria media (CI 50 ) estimada fue 12,3% v/v (IC 95% 9,5–15,1). Las diferencias frente a clorhexidina al 50% y 100% no fueron estadísticamente significativas, pero sus intervalos de confianza fueron compatibles con diferencias de hasta 28 y 21 puntos porcentuales. Conclusiones . El látex purificado de C. lechleri inhibió la actividad metabólica de S. mutans planctónico de forma dependiente de la concentración. Estos hallazgos preliminares no demuestran equivalencia con la clorhexidina y justifican su replicación con experimentos independientes, extractos químicamente estandarizados en mg/mL, determinación de CMI/CMB y modelos de biopelícula.
Palabras clave Croton lechleri ; sangre de grado; Streptococcus mutans ; caries dental; resazurina; proantocianidinas
